Original en inglés escrito por Madison Williams, Febrero 10, 2021 (English version)
Traducido por Tiffany Riascos
Escala de diversión: 3/5
Escala de dificultad: 2/5
¿Cuál es el propósito general? El método Bradford detecta la concentración de proteína en una solución con base en el cambio de color del colorante empleado.
¿Por qué lo usamos? Esta técnica se usa para determinar la cantidad de proteína en una muestra. Una razón por la cual podrías necesitar saber cuánta proteína hay en tu muestra es si vas a realizar un Western Blot. En el momento de llevar a cabo un Western Blot, necesitas saber que cantidad de tu muestra debes añadir para obtener una cantidad específica de proteína total. ¡El método Bradford es una manera rápida y sencilla de hacer esto!
¿Cómo funciona? El método Bradford utiliza un colorante azul especial llamado azul de Coomassie, el cual puede unirse a las proteínas presentes en una muestra. El colorante cambia el color de la muestra dependiendo de la cantidad de proteína a la cual puede unirse. Al principio, el azul de Coomassie es marrón, y a medida que se une a la proteína en la muestra se torna azul. El método Bradford se puede observar a continuación- cuanta más proteína haya en la muestra, más saturado será el color azul. Las muestras con menor cantidad de proteína permanecerán color marrón o azul claro. ¡Échale un vistazo a los diferentes colores!
Preparación
Primero vas a necesitar una placa de 96 pozos (como la que aparece en la imagen anterior). Al hacer este ensayo, debes usar una proteína con una concentración conocida (proteína estándar). El estándar de proteína de Albúmina de Suero Bovino (BSA por sus siglas en inglés) se debe añadir a 8 de los pozos en diferentes concentraciones. Esta proteína estándar sirve como un punto de referencia. Dado que el estándar se divide en diferentes concentraciones entre los 8 pozos, algunos pozos adoptarán un color diferente. El color de unos cuantos pozos será cercano al marrón, mientras que el color de otros será azul.
Luego, una pequeña cantidad de la muestra de proteína es añadida en los pozos vacíos al lado de los estándares. La cantidad de pozos que usarás dependerá de cuántas muestras tengas. Después, el colorante azul de Coomassie debe ser añadido a las muestras de proteína que deseas cuantificar. Ubica tu placa en un agitador para placas (como el que aparece en la siguiente imagen) por 30 segundos. Esto va a asegurar que tu muestra y el colorante azul de Coomassie se mezclen bien. Para el siguiente paso, necesitarás incubar tu placa a temperatura ambiente. Asegúrate de ponerla en un espacio oscuro, como un cajón, por 10 minutos.
Después de que tus muestras hayan sido incubadas, el paso final es utilizar un lector de placas para “leer” cada muestra. La máquina usará el color de la muestra para determinar la cantidad de proteína presente comparada con el estándar. Al finalizar, sabrás cuánta proteína hay en tu muestra y podrás utilizar este conocimiento para calcular la cantidad de muestra que necesitas emplear para tu Western Blot.
¡Y eso es todo! Muy fácil, ¿cierto? ¡Típicamente este experimento lo puedes realizar en alrededor de 30 minutos!
